蔗糖酶是根据其酶促基质一蔗糖而得名的,又叫转化酶或卩-呋喃果糖苷酶。它对增加土壤中易溶性营养物质起着重要的作用=研究证明,蔗糖酶与土壤许多因子有相关性,如与土壤有机质氮、磷含量,微生物数量及土壤呼吸强度有关=一般情况下,土壤肥力越高,蔗糖酶活性越强。它能够表征土壤生物学活性强度,也可以作为评价土壤熟化程度和土壤肥力水平的一个指标。
土壤中蔗糖酶活性的测定方法比较多,有物理方法和化学方法.
物理方法是根据酶促反应前后蔗糖旋光特性的改变而测得。化学法是根据酶促反应过程中释放出的还原糖,用滴定法、比色法和氧化铜还原法测得=本实验采用硫代硫酸钠滴定法,它是我国常用的测定蔗糖酶活性的经典方法。
1测定原理
蔗糖酶能促蔗糖水解成葡萄糖和果糖。蔗糖酶活性的测定采用硫代硫酸钠滴定法,用碘量法测出蔗糖水解时生成的还原己糖的量。蔗糖酶活性以24h后lg 土消耗的0.1 mol • L -1硫代硫酸钠毫升数表示。
2实验步骤
称取10g过lmm筛的风干土样(2份作为平行),置于100ml容量瓶中,加1.5ml甲苯(以全部湿润土样为准),室温下放置15min。
加20%蔗糖溶液和磷酸盐缓冲液各10ml,混合均匀放于38C恒温箱中培养,培养23h后,用热至38C的水定容(甲苯浮于刻度以上),充分混合后重新置于恒温箱中再培养lh,培养结束后,将悬液用致密滤纸过滤于100ml三角瓶。吸取20ml滤液于另一 100ml三角瓶中,加入10ml啡啉溶液和20ml蒸馏水,将三角瓶置于沸水浴上加热lOmin,然后立即在冷水下冷却至251:,先加3ml33%碘化钾溶液,再加4ml稀硫酸(1:3),然后用0.1 mol/1的Na2S2O3溶液尽快滴定,到达终点前(淡黄色)加0.5ml淀粉指示剂,再滴定至蓝色刚消失.对每一个样品同时做无基质对照。
结果计算:M= (V2—V,) X100/ (20X10)
式中:M为蔗糖酶活性值
V2为对照试验所消耗的硫代硫酸钠毫升数
V;为样品试验所消耗的硫代硫酸钠毫升数
100为10g 土样定容体积(ml)
20为用于滴定的试样体积(ml)
10为样品重量克数(g)