测定原理

样品经混合酸消化后，有机物被破坏使硒游离出来，还原后在酸性溶液中硒和2，3-二氨基萘(简称DAN)反应生成4，5-苯并苤硒脑，其荧光强度与硒的浓度在一定条件下成正比。加入EDTA和盐酸羟胺，可消除试液中铁、铜、钼及大量氧化性物质对全硒测定的干扰。用环己烷萃取后在荧光光度计上于激发波长376nm、发射波长525nm处测定荧光强度，与绘制的标准工作曲线比较定量。本方法最低检测量为3ng。

仪器设备

1.分析常用仪器设备。

2.荧光光度计：配有光程为1cm的石英比色皿。

3.自动控温消化炉。

试剂

试剂同原子荧光光谱法1、2、3、4、6、7、8、9、10，本方法另需以下试剂：

1.环己烷，0.778耀0.80g/mL。

2.(1+1)氨水溶液。

3.盐酸羟胺-乙二胺四乙酸二钠(EDTA)溶液：称取10gEDTA溶于500mL水中，加入25g盐酸羟胺，使其溶解，用水稀释至100mL。

4.2，3-二氨基萘溶液(暗室中配制)，1g/L：称取0.1g2，3-二氨基萘于150mL烧杯中，加入100mL盐酸溶液(8)使其溶解，转移到250mL分液漏斗，加入20mL环己烷(11)振荡1min，待分层后弃去环己烷，重复使用环己烷处理3耀4次。水相放入棕色瓶中，水相上面加盖约1cm厚的环己烷，于暗处置冰箱保存。必要时再纯化一次。

5.甲酚红指示剂，0.2g/L：称取0.02g甲酚红于400mL烧杯中，加水溶解，加氨水溶液(12)1滴，溶解后加水稀释到10mL。

步骤一：试液制备

同氢化物发生-原子荧光光谱法步骤一。

步骤二：试液的测定

吸取10.0-20.0mL还原定容后的待测溶液于100mL具塞三角瓶中，加10mL盐酸羟胺-乙二胺四乙酸二钠(EDTA)溶液(13)，混匀，加2滴甲酚红指示剂(15)，溶液呈桃红色，滴加氨水溶液(12)至出现黄色，继续加入至呈桃红色，再用盐酸溶液(7)调至橙黄色(pH为1.5-2.0)。以下步骤在暗室进行：加2mL2，3二氨基萘溶液(14)，混匀，置沸水浴中煮5min，取出冷却至室温。准确加入5mL环己烷(11)，盖上瓶塞，在振荡器上振荡10min后将溶液移入分液漏斗中，待分层后弃去水层，将环己烷层转入带盖试管中，小心勿使环己烷层中混入水滴，于激发波长376nm、发射波长525nm处测定苯并苤硒脑的荧光强度，查标准工作曲线，得到试样溶液中硒的质量数值。

步骤三：空白实验

除不加试样外，其余分析步骤同步骤二。

步骤四：工作曲线绘制

用硒标准使用液(10)逐级稀释配制成含Se分别为0.0μg/L、1.0μg/L、2.0μg/L、4.0μg/L、8.00μg/L的标准溶液。各吸取20.00mL使其硒含量分别为0.00ng、20.00ng、40.0ng、80.00ng、160.00ng，放入10mL具塞三角瓶中，按试液测定步骤二同时进行。

步骤五：数据记录与处理

全硒(Se)含量w3，以质量分数计，单位为mg/kg，计算方法同氢化物发生-原子荧光光谱法。