测定原理
样品经混合酸消化后,有机物被破坏使硒游离出来,还原后在酸性溶液中硒和2,3-二氨基萘(简称DAN)反应生成4,5-苯并苤硒脑,其荧光强度与硒的浓度在一定条件下成正比。加入EDTA和盐酸羟胺,可消除试液中铁、铜、钼及大量氧化性物质对全硒测定的干扰。用环己烷萃取后在荧光光度计上于激发波长376nm、发射波长525nm处测定荧光强度,与绘制的标准工作曲线比较定量。本方法最低检测量为3ng。
仪器设备
1.分析常用仪器设备。
2.荧光光度计:配有光程为1cm的石英比色皿。
3.自动控温消化炉。
试剂
试剂同原子荧光光谱法1、2、3、4、6、7、8、9、10,本方法另需以下试剂:
1.环己烷,0.778耀0.80g/mL。
2.(1+1)氨水溶液。
3.盐酸羟胺-乙二胺四乙酸二钠(EDTA)溶液:称取10gEDTA溶于500mL水中,加入25g盐酸羟胺,使其溶解,用水稀释至100mL。
4.2,3-二氨基萘溶液(暗室中配制),1g/L:称取0.1g2,3-二氨基萘于150mL烧杯中,加入100mL盐酸溶液(8)使其溶解,转移到250mL分液漏斗,加入20mL环己烷(11)振荡1min,待分层后弃去环己烷,重复使用环己烷处理3耀4次。水相放入棕色瓶中,水相上面加盖约1cm厚的环己烷,于暗处置冰箱保存。必要时再纯化一次。
5.甲酚红指示剂,0.2g/L:称取0.02g甲酚红于400mL烧杯中,加水溶解,加氨水溶液(12)1滴,溶解后加水稀释到10mL。
步骤一:试液制备
同氢化物发生-原子荧光光谱法步骤一。
步骤二:试液的测定
吸取10.0-20.0mL还原定容后的待测溶液于100mL具塞三角瓶中,加10mL盐酸羟胺-乙二胺四乙酸二钠(EDTA)溶液(13),混匀,加2滴甲酚红指示剂(15),溶液呈桃红色,滴加氨水溶液(12)至出现黄色,继续加入至呈桃红色,再用盐酸溶液(7)调至橙黄色(pH为1.5-2.0)。以下步骤在暗室进行:加2mL2,3二氨基萘溶液(14),混匀,置沸水浴中煮5min,取出冷却至室温。准确加入5mL环己烷(11),盖上瓶塞,在振荡器上振荡10min后将溶液移入分液漏斗中,待分层后弃去水层,将环己烷层转入带盖试管中,小心勿使环己烷层中混入水滴,于激发波长376nm、发射波长525nm处测定苯并苤硒脑的荧光强度,查标准工作曲线,得到试样溶液中硒的质量数值。
步骤三:空白实验
除不加试样外,其余分析步骤同步骤二。
步骤四:工作曲线绘制
用硒标准使用液(10)逐级稀释配制成含Se分别为0.0μg/L、1.0μg/L、2.0μg/L、4.0μg/L、8.00μg/L的标准溶液。各吸取20.00mL使其硒含量分别为0.00ng、20.00ng、40.0ng、80.00ng、160.00ng,放入10mL具塞三角瓶中,按试液测定步骤二同时进行。
步骤五:数据记录与处理
全硒(Se)含量w3,以质量分数计,单位为mg/kg,计算方法同氢化物发生-原子荧光光谱法。